目的：研究衰老骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）的氧化应激水平，以及氧自由基（reactive oxygen species，ROS）对其成骨分化的影响，探索ROS升高的分子机制。方法：通过碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）染色及实时定量RT-PCR比较年轻及衰老BMSCs成骨分化能力，利用荧光显微镜及流式细胞术检测BMSCs中ROS水平，并检测超氧化物歧化酶2（superoxide dismutase2，SOD2）及过氧化氢酶（catalase，CAT）在不同BMSCs中的表达水平。结果：发现衰老BMSCs的成骨分化能力较年轻BMSCs显著下降，衰老BMSCs内ROS水平升高是导致其成骨分化下降的重要因素；SOD2及CAT介导的抗氧化机制异常导致ROS上升。结论：抗氧化酶表达下降引起衰老BMSCs内ROS水平升高，抑制其成骨分化。

目的：探讨肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor α，TNF-α）对牙周膜干细胞（periodontal ligament stem cells，PDLSCs）和颌骨骨髓间充质干细胞（jaw bone marrow mesenchymal stem cells，JBMMSCs）两种干细胞自噬水平的影响。方法：通过胰酶消化法体外分离培养PDLSCs/JBMMSCs，流式细胞仪及实时定量RT-PCR筛选短时间内不导致细胞凋亡的TNF-α的最大浓度，然后与PDLSCs/JBMMSCs共培养，Western blot检测不同时间点两种细胞自噬和凋亡的表达水平。结果：成功地筛选出TNF-α的最佳浓度为50 ng/mL。采用该浓度作用于PDLSCs/JBMMSCs，短期作用（24 h）可以激活细胞的自噬水平，凋亡水平下降；如果TNF-α持续作用，细胞的自噬水平反而下降，凋亡增加。结论：在一定的条件下，TNF-α可以激活PDLSCs/JBMMSCs的自噬水平，免于细胞发生凋亡。

目的：探讨肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor -α，TNF-α）通过激活核转录因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）信号通路调控其对人牙周膜干细胞（periodontal ligament stem cells，PDLSCs）成骨分化的影响。方法：通过组织块法体外分离培养健康牙周膜来源的PDLSCs；在hPDLSCs的正常培养液、成骨诱导培养液中分别加入10 ng/mL的TNF-α，通过碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）和茜素红染色定量检测其成骨分化功能的改变，采用实时定量RT-PCR和Western bolt检测成骨相关基因的表达和NF-κB信号通路相关因子表达差异。将NF-κB信号通路抑制剂BAY 11-7082加入含有TNF-α的hPDLSCs正常、成骨诱导培养液中，检测hPDLSCs生物学特性改变。结果：在一定浓度TNF-α刺激下，hPDLSCs的成骨分化能力减弱；同时，TNF-α能激活NF-κB信号通路，从而抑制hPDLSCs的成骨分化作用，而BAY 11-7082能逆转其抑制成骨作用。结论：炎症因子TNF-α能通过调控NF-κB信号通路调节hPDLSCs的成骨分化作用。

目的：探讨炎症微环境中经典Wnt信号通路对牙周膜干细胞（periodontal ligament stem cells , PDLSCs）成骨分化的调控用。方法：通过有限稀释法获得健康个体和慢性牙周炎患者的牙周膜干细胞（H-PDLSCs和P-PDLSCs），比较两组PDLSCs成骨分化能力。成骨诱导后western blot检测经典Wnt信号通路关键分子GSK3β/p-GSK3β和β-catenin在两种细胞中的表达；TOPFlash/FOPFlash荧光素酶检测β-catenin/TCF转录活性；加入GSK3β抑制剂后，茜素红染色观察PDLSCs成骨能力的变化；小分子RNA下调β-catenin，ALP染色观察PDLSCs成骨分化。结果：P-PDLSCs的成骨分化能力低于H-PDLSCs；在P-PDLSCs中p-GSK3β和β-catenin的蛋白表达水平较H-PDLSCs明显增高；TNF-α是炎症微环境中抑制牙周膜干细胞成骨分化的关键因子之一；小分子RNA干扰下调β-catenin可减弱TNF-α引起的成骨能力下降；LiCl或Wnt3a抑制GSK3β活性后，PDLSCs成骨分化受到抑制。结论：GSK3β的磷酸化和Wnt/β-catenin信号通路的激活是炎症环境中TNF-α抑制PDLSCs成骨分化的关键步骤。

目的：寻找雌激素缺乏所导致的骨质疏松环境下调控小鼠骨髓基质干细胞（mouse bone marrow stromal stem cells，mBMSCs）成骨的关键miRNA，并探讨此miRNA在雌激素缺乏所导致的骨质疏松微环境下是否参与调控mBMSCs成骨及其在此种微环境下对成骨的调控作用。方法：建立卵巢切除动物模型，通过生物信息学技术以及miRNA基因芯片技术对卵巢切除组和假手术组的C57BL/6J小鼠来源的mBMSCs进行对比筛选，确定调控mBMSCs成骨的关键miRNA；利用实时定量RT-PCR技术验证此miRNA在两组mBMSCs成骨分化过程中的表达差异；通过细胞转染技术上调和下调此miRNA，实时定量RT-PCR、Western blot、茜素红和碱性磷酸酶染色等技术观察转染后mBMSCs的成骨能力。结果：生物信息学技术以及miRNA基因芯片技术筛选确定调控mBMSCs成骨的关键miRNA为miR-21；实时定量RT-PCR显示miR-21在卵巢切除组mBMSCs成骨分化中的水平较假手术组低；转染miR-21至卵巢切除组mBMSCs，能部分恢复其成骨分化能力。结论：miR-21是雌激素缺乏所导致的骨质疏松环境中调控mBMSCs成骨分化的关键miRNA；miR-21在雌激素缺乏所导致的骨质疏松环境中能促进mBMSCs的成骨分化。

目的：观察人脐带间充质干细胞（human umbilical cord derived mesenchymal stem cells，hUCMSCs）体外长期传代扩增后形态表型、增殖及分化特性的变化。方法：分别以双酶消化及组织块法分离培养hUCMSCs；细胞传至18代（P18），观察细胞形态、生长曲线、克隆形成、细胞周期、干细胞表型、多向分化能力的变化，全面评测连续传代对hUCMSCs生物学特性的影响。结果：双酶消化结合组织块法可高效分离获得大量hUCMSCs，细胞稳定传代并保持间充质干细胞特性；早期细胞多呈长梭形或纺锤形，至P18时呈多角不定型且细胞体积变大，胞浆增加明显。传代至P18后，hUCMSCs的群体倍增时间增加至60 h以上，绝大多数细胞处于G0/G1期，且成纤维细胞集落形成单位（colony-forming unit-fibroblast，CFU-F）形成降低，克隆集落减小。hUCMSCs可表达且不因持续传代丢失间充质干细胞标记，但仅早期传代细胞表达多能干细胞标记Oct-4及SSEA-4。特异性染色及相关基因表达检测提示P18hUCMSCs的成脂肪、成软骨及成骨诱导分化能力较早期传代细胞减弱。结论：HUCMSCs是具备高增殖活性和多向分化特性的间充质干细胞群，体外长期传代扩增的hUCMSCs呈现一定的复制性衰老趋势，但不会丢失干性，可稳定表达间充质干细胞特异性表面标记并保持分化活性。

目的：对比不同特异性组织来源的间充质干细胞的牙周再生能力。方法：体外培养人牙周膜干细胞（human periodontal ligament stem cells , hPDLSCs），人颌骨来源的骨髓间充质干细胞（human jaw-derived bone marrow-derived mesenchymal stem cells , hJBMMSCs）和人髂骨来源的骨髓间充质干细胞（human iliac-derived BMMSCs , hIBMMSCs），成骨诱导后进行成骨指标检测。间接共培养JBMMSCs/IBMMSCs与PDLSCs，通过RTPCR检测成骨相关基因，观察组织特异性来源的细胞间交互作用。构建JBMMSCs/IBMMSCs+PDLSCs细胞聚合体(cell aggregates，CAs），检测成骨基因表达以及裸鼠皮下8w异位牙周再生能力。结果：经成骨诱导，hJBMMSCs的成骨相关指标表达均显著高于hIBMMSCs和hPDLSCs（p<0.05）。经JBMMSCs诱导的PDLSCs的成骨基因表达显著高于IBMMSCs（p<0.05）；JBMMSCs+PDLSCs CAs成骨相关基因表达高于IBMMSCs+PDLSCs CAs（p<0.05），并且在裸鼠皮下异位再生牙周组织，前者形成排列规律的垂直于CBB表面的牙周膜样纤维，并且有更多新生骨基质沉淀。结论：PDLSCs和JBMMSCs是具有组织特异性的间充质干细胞，是更合适牙周组织再生的种子细胞。

目的： 通过比较正常与炎症来源牙周膜干细胞（PDLSCs）中乙酰基转移酶KAT2A表达水平的差异，研究乙酰基转移酶KAT2A在PDLSCs中对成骨分化的调控。方法：有限稀释法克隆化培养出正常与炎症来源的PDLSCs；基因与蛋白检测方法对比两种来源PDLSCs中KAT2A的表达水平；基因、蛋白检测与茜素红染色方法对比正常PDLSCs及干扰KAT2A基因后的PDLSCs成骨表达的差异。结果：与健康来源PDLSCs相比，炎症来源PDLSCs中KAT2A的表达显著下降，差异有统计学意义（P＜0.05）；KAT2A基因被干扰后，PDLSCs成骨能力下降，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：牙周炎会导致PDLSCs中KAT2A表达的下降，导致细胞成骨分化受到抑制。

目的：通过检测C/EBPβ、PPAR-γ基因的表达探讨糖基化终末产物（AGEs）对人牙周膜干细胞（HPDLSCs）脂向分化能力的影响。方法：体外组织块法和有限稀释法克隆化培养人牙周膜干细胞；成骨、成脂诱导人牙周膜细胞，对其进行干细胞鉴定；分别成脂诱导正常的人牙周膜干细胞和AGEs刺激下的人牙周膜干细胞，油红O染色观测两组细胞脂滴形成情况；实时定量聚合酶链反应（Real time PCR）检测成脂诱导后AGEs刺激下C/EBPβ、PPAR-γ表达的改变。结果：牙周膜细胞成骨诱导21天后茜素红染色出现钙化结节；成脂诱导21天后油红O染色出现脂滴；AGEs刺激后人牙周膜干细胞成脂过程中脂滴的形成增多；Real time PCR结果显示：AGEs刺激7天后C/EBPβ、PPAR-γ mRNA表达水平较对照组升高，差异有统计学意义（p<0.05）。结论：AGEs可以促进人牙周膜干细胞的脂向分化并能改变C/EBPβ、PPAR-γ mRNA的表达。

目前临床上对骨性Ⅲ类错牙合畸形提倡早期矫治，常用的方法有FR-Ⅲ型功能性矫治器及改良式牙合垫、上颌前方牵引等矫治方法。其中上颌前方牵引被认为是较为有效而简便的方法，对于上颌骨发育不足的患者可牵引上颌骨向前下方生长，同时引导下颌向下、向后旋转。本文旨在对上颌前方牵引矫治骨性Ⅲ类错牙合畸形的疗效及机制进行综述。