目的：研究与牙齿发育相关的骨形态发生蛋白7（bone morphogenetic proteins 7，BMP7）信号分子在小型猪乳磨牙胚中的特异性时空表达情况。方法：采用小型猪第三乳磨牙胚作为研究对象，获取不同孕期的小型猪胎猪胚胎的下颌骨，分别进行HE染色、免疫组织化学染色、放射性核素标记探针的原位杂交及实时定量RT-PCR检测BMP7分子在小型猪乳磨牙不同发育时期的表达情况。结果：HE染色显示小型猪第三乳磨牙在胚胎E40、E50、E60分别处于帽状期、钟状期以及钟状晚期（分泌期）。免疫组织化学染色从蛋白水平显示，BMP7在E40时在成釉器和间充质均有表达，成釉器表达相对强于间充质；在E50时，BMP7仍然表达在牙胚成釉器和间充质，与E40表达情况类似；在E60时则主要集中表达在间充质特别是前成牙本质细胞和前成釉细胞。原位杂交与实时定量RT-PCR从mRNA水平也验证了其表达趋势与免疫组织化学基本一致。结论：BMP7信号分子在小型猪乳磨牙发育过程中呈特异性的时空表达，提示其与牙齿形态发生和细胞分化相关。

目的：研究小鼠舌肌发育的分子调控机制。方法：取胚胎第13.25天（E13.25）及E15.5小鼠舌组织。应用Affymetrix Mouse GeneChip，对胎鼠舌发育过程中的差异基因进行筛选。应用DAVID网络分析工具对基因进行功能和聚类分析。结果：基因功能和聚类分析表明，在E13.25高表达的基因主要与细胞周期相关因子（Exo1、Gsk3B、Kif20b、Skp2）和细胞粘附因子（Neo1、lama1）等相关。在E15.5高表达的基因主要与细胞骨架（titin、Hspb7）相关。结论：小鼠舌组织增殖和特化与细胞周期和细胞粘附基因相关，舌组织分化和成熟主要与细胞骨架相关。

目的：骨髓基质细胞（bone marrow stromal cells，BMSCs）在调节颅骨锁骨发育不全（cleidocranial dysplasia，CCD）患者骨结构中发挥关键作用，本研究通过与正常BMSCs比较分析，探讨CCD患者BMSCs的体外增殖、成骨分化、干性及衰老特征。方法：分离培养CCD患者及正常同龄人BMSCs；甲基噻唑基四唑（MTT）法及流式细胞周期分析其增殖能力；成骨诱导后采用Western blot及茜素红染色分析其成骨能力；检测多潜能转录因子及克隆形成，分析其干性能力；检测衰老调控关键基因p16、p21表达及通过β-gal衰老染色分析其衰老特征。结果：与正常BMSCs相比，BMSCs-CCD增殖活性低，且细胞周期中处于S期、G2的细胞比例较低；两组细胞成骨诱导1、3、7 d后，BMSCs-CCD组中Runt相关转录因子2（Runt-related transcription factor 2，Runx2）、成骨细胞特异性转录因子Osterix、骨桥蛋白（Osteopontin，Opn）表达水平较正常组低；成骨诱导14 d后，BMSCs-CCD组形成的钙化结节较正常组少；BMSCs-CCD组中多潜能转录因子Oct4、Nanog、Sox2表达及克隆形成率均较正常组低；相反，BMSCs-CCD组中p16、p21等衰老标记分子表达及衰老细胞阳性染色比例均较正常组高。结论：同正常BMSCs比较，CCD患者BMSCs的增殖能力、成骨能力、干性强度均较差，且更易衰老。这些特征可能是CCD患者易发骨质疏松及骨折的生物学机制之一。

目的：研究人骨形态发生蛋白-2（bone morphogenetic protein，BMP-2）对人炎症牙髓组织来源的牙髓干细胞（dental pulp stem cells from inflamed pulps，DPSCs-IPs）体外骨向诱导分化的影响。方法：取第三代DPSCs-IPs，按是否于培养基中加入BMP-2分成：BMP-2+DPSCs-IPs组（实验组）和DPSCs-IPs组（对照组）。无成骨诱导条件培养1周后，对各组分泌的胶原基质行Trichrome染色，观察并比较实验组和对照组之间的骨向诱导分化情况；实时定量RT-PCR检测二者的Ⅰ型胶原蛋白（collagenⅠ，COL-Ⅰ）mRNA表达情况。在成骨诱导条件下，培养3周后对各组分泌的钙化基质行Von Kossa染色，通过实时定量RT-PCR检测转录因子及成骨相关基因的表达。结果：无成骨诱导培养1周后，实验组DPSCs-IPs分泌的胶原基质Trichrome染色较对照组深，COL-ⅠmRNA的表达水平显著上调（P<0.05），说明BMP-2可诱导DPSCs-IPs沉积更多的胶原基质；成骨诱导培养3周后，相对于对照组，实验组DPSCs-IPs沉积了更多的钙化基质，Nanog、八聚体结合转录因子4（octamer-binding transcription factor 4，Oct4）、性别决定区因子（SRY-related high-mobility group box 2，Sox2）等转录因子表达升高，碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）、骨钙素（osteocalcin，OCN）、骨涎蛋白（bone sialoprotein，BSP），牙骨质蛋白1（cementum protein 1，CEMP-1）、COL-Ⅰ等成骨相关基因表达水平显著上调（P<0.05）。结论：BMP-2在成骨诱导条件下可促进DPSCs-IPs进行体外骨向诱导分化。

目的：检测维甲酸（Retinoic acid, RA）诱导小鼠胚胎腭裂模型中胎鼠舌体发育过程中肌相关microRNAs（MyomiRs）、成肌调节因子（Myogenic regulatory factors，MRFs）以及Pax基因的表达变化，探究MyomiRs在舌肌分化过程中的调控作用，推测RA致胎鼠腭裂伴发舌异常的可能机制。方法：建立RA诱导小鼠胚胎腭裂模型，分别在E13.5、E14.5、E15.5收集胎鼠舌体组织，用SYBR GreenⅠ实时定量PCR检测舌体中MRFs和Pax基因的表达；用TaqMan探针实时定量PCR检测舌体中MyomiRs的表达。结果：胎鼠舌体发育过程中，正常组miR-1和miR-206相对表达量均持续上升，RA诱导组二者变化趋势与正常组相似，但相对表达量均低于正常组，miR-1的结果在E14.5和 E15.5具有统计学意义（P<0.01），miR-206的结果在E13.5具有统计学意义（P<0.05）。正常组和RA诱导组胎鼠舌体中MyoD和Myf5相对表达量都在E14.5达到峰值，随后下降。RA诱导组MyoD的表达在E14.5显著低于正常组（P<0.05），在E15.5显著高于正常组（P<0.01）；RA诱导组Myf5的表达在E15.5显著低于正常组（P<0.05）。正常组和RA诱导组胎鼠舌体中Pax3表达均在E14.5达到峰值，Pax7表达均在E15.5达到峰值。RA诱导组Pax3的表达在E14.5显著高于正常组（P<0.05）；Pax7的表达则在E13.5显著高于正常组（P<0.01）。结论：在舌肌分化过程以及RA诱导腭裂胎鼠的舌发育异常中，miR-1/miR-206与Pax3/Pax7及Myf5/MyoD的表达趋势具有相关性。RA可能通过下调miR-1/miR-206而靶向上调Pax3/Pax7，进而下调MyoD/Myf5表达，从而抑制舌肌分化，导致舌肌发育异常。

目的：比较不同蛋白质提取方法在牙胚蛋白提取中的效果，寻找适合牙齿发育高通量蛋白质组学分析的蛋白质提取方法。方法：取猪胚胎第50、60天第三乳磨牙牙胚，利用碱性碳酸盐溶液提取牙胚初步钙化部分的蛋白，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳比较液氮研磨法和电动研磨器研磨法提取牙胚总蛋白效果，BCA（bicinchoninic acid）蛋白浓度测定法比较RIPA裂解液与尿素溶液提取牙胚总蛋白含量。结果：与液氮研磨法相比，电动研磨法提取蛋白后的聚丙烯酰胺电泳图谱蛋白条带明显更深，蛋白含量高。尿素溶液对牙胚总蛋白的提取量高于RIPA裂解液组，蛋白电泳分离效果均可。结论：采用电动研磨器研磨牙胚，组织损失量小，提取蛋白效果好于液氮研磨；采用尿素溶液提取牙胚总蛋白效果优于RIPA裂解液。初步找到适合下游高通量蛋白质组学分析的牙胚蛋白提取方法。

目的：研究深低温冻存对牙周膜干细胞膜片增殖和分化能力的影响。方法：将牙周膜干细胞膜片用90%胎牛血清+10% DMSO冻存液冻存3月后复苏，采用甲基噻唑基四唑（MTT）法、von Kossa染色和油红O染色法检测冻存对增殖和分化的影响。结果：冻存牙周膜干细胞膜片与新鲜牙周膜干细胞膜片的增殖率和成骨、成脂分化能力没有明显差异。结论：牙周膜干细胞膜片经深低温保存后可继续保持冻存前原有的增殖能力和多向分化能力。

目的:牙源性上皮细胞在牙齿萌出后基本消失，研究表明非牙源性上皮细胞可作为牙发育再生的替代种子细胞，本研究旨在优化条件培养基用于非牙源性上皮细胞的体外扩增，为进一步开展组织工程牙提供上皮种子细胞来源奠定基础。方法：获取出生后1d C57BL鼠原代口腔黏膜上皮细胞，接种于含有Y27632的上皮条件培养基的培养瓶内。细胞长满后，消化传代，采用条件培养基与3T3饲养层细胞共培养进行扩增并连续传代，观察细胞生长情况及连续传代后的生物学特性，免疫组织化学进行干细胞鉴定。结果：与传统上皮细胞培养方式相比，含Y27632的条件性培养基加3T3饲养层方式培养的上皮细胞生长迅速，细胞呈立方形或多角形，呈铺路石样排列。免疫组织化学染色表明这些干细胞表达CK14，SOX2和LGR5。连续传代至第7代后，细胞形态、生长曲线和干细胞标志没有明显变化。结论：含有Y27632的条件培养基可有效用于体外大量扩增非牙源性上皮细胞，并能保持干细胞生长特性，有望用于组织工程牙的种子细胞来源。

目的：探究两种fimA型牙龈卟啉单胞菌对人脐动脉平滑肌细胞增殖的影响。方法：采用组织块贴壁法培养人脐动脉平滑肌细胞。在厌氧条件下培养ⅠfimA、ⅣfimA型牙龈卟啉单胞菌，并与人脐动脉平滑肌细胞共同培养；在刺激后2、8、24和48h时，采用CCK-8法检测细胞生长状况。结果：ⅠfimA型牙龈卟啉单胞菌刺激人脐动脉平滑肌细胞后8h，促增殖作用明显，但是24和48h平滑肌细胞增殖受到抑制（P<0.05）；ⅣfimA型牙龈卟啉单胞菌对人脐动脉平滑肌细胞没有明显促细胞增殖或细胞毒性作用。结论：ⅠfimA型和ⅣfimA型牙龈卟啉单胞菌对人脐动脉平滑肌细胞的作用存在差异，ⅠfimA型牙龈卟啉单胞菌有明显的促平滑肌细胞增殖和细胞毒性作用。

唇腭裂是口腔颌面部最常见的一种先天性发育畸形，占颌面部先天性畸形的65％左右，是一种复杂的、由遗传和环境因素相互作用所致的多基因多因素遗传病。现已发现很多与唇腭裂相关的基因，包括TGFα、F13A、BCL3、MSXl、RARA、TGF-β3、SHH等。本文综述了TGF-β信号通路中2个与唇腭裂发病相关的热点基因TGF-β3和TGFBR1的研究现状，拟为唇腭裂的机制研究提供线索

本文介绍了JMJD2基因家族的成员组成，简述了其在组蛋白甲基化修饰中的作用及其机制，指出JMJD2D基因通过调控组蛋白甲基化及去甲基化过程参与多种基因组过程。分析提出对JMJD2D基因在干细胞分子机制水平的研究将促进其在干细胞组织生物工程学中的发展和应用，为未来的研究指明了方向。